皮内试验概况及操作程序

皮内试验是在模拟异位性皮炎——使皮肤接触空气抗原，并观察其反应。试验的特异性为50-90%（排除其他瘙痒症特异性将提高），敏感性为90%。对于季节性发病的动物，试验时间最好选择在症状出现的2-3个月后。

操作程序：

1．将动物镇静并侧卧。赛拉嗪（Xylazine）0.5-0.75mg/kg，或美托咪定（medetomidine）10-20μg/kg，是适合的镇静剂。很多其他的麻醉或镇静剂会降低皮内试验的反应性。

2．将胸廓轻柔剃毛，面积为15×10cm。

3．预先用黑色记号笔标出注射点。

4．将每种抗原以0.05ml的剂量注射入标记点对应的真皮内，同样剂量的组胺（1：100，000）作为阳性对照,生理盐水作为阴性对照。

5．10-20分钟后读取反应结果。皮肤会出现风疹样变化,阳性对照为4分，阴性对照为0分。其他注射部位通过风疹面积、发红程度、隆起高度与阳性和阴性对照相比，人为给予评分。最高分为4分，最低分为0分。

6．少数病例会在24-48小时后出现迟发型变态反应，需要主人在家观察，或住院观察。

7. 最为脱敏治疗的抗原种类不要超过10种，注射剂量从低浓度向高浓度逐渐递增，注射间隔逐渐拉长，从最初的间隔一天，到最后可能保持在10-20天注射一次。通常为终生性治疗。

皮内注射时注射技术问题导致局部刺激，可能引起假阳性反应，例如针头损伤、注入空气和抗原容量大于对照组。假阴性反应可能缘于药物干扰（例如糖皮质激素、抗组胺药，降血压药等）。理论上讲，应激可以导致自体糖皮质激素升高，使皮肤过敏试验无反应。注射技术错误，例如注射于皮下而不是皮内；或是抗原量过低，让皮肤不能形成应有的反应；抗原过期或过度稀释等因素均使结果为假阴性。

皮内试验前要停用所有糖皮质激素和抗组胺药（见表1）；试验时需要剃毛，并镇静动物；另外需要购买多种抗原试剂，并合理保存；医生判读结果的能力需要特殊的培训。由于上述原因，在欧美等国家，做皮内试验的病例需要转诊至皮肤病专科医院。

目前世界知名的犬过敏原生产公司有Greer、Heska、Artuvetrin等。国际卫生组织已经建立了人医用抗原标准化，而兽医用抗原则没有标准化。因此无从得知哪家公司的产品（包括人医和兽医）更有优势，。兽医临床常将水性抗原提取物用于皮内试验。抗原的储存基质是甘油。抗原均为浓缩制剂，更适合作为疫苗，用于脱敏治疗，稀释后才能用作皮内试验的试剂。通常稀释后的抗原保存时间变短，即使正确存放，通常必须在8周内用完。

皮肤病医生根据当地的植物群等选择抗原,抗原种类越多越好，当然费用也会随之升高。当地抗原的信息可以到过敏实验室、兽医皮肤病专科医院、人医变态反应科室和气象局等处了解，也可以查阅兽医过敏性皮肤病的文献和教科书。需要注意的是，对人重要的抗原未必对犬也同样重要。即使植物和传粉很确定的区域，植被和气候也存在变数。所以应该每年评估皮内试验用抗原的种类，并且制定新的抗原种类，很少出现阳性反应的抗原应该剔除掉。大量环境抗原涉及于犬AD的发病机制中。

众多专家和学者通过皮内试验总结了AD犬反应阳性的空气抗原种类。常用抗原包括屋尘、表皮螨属、各种皮屑、树种、草和杂草、花粉、霉菌及其他混杂抗原。表皮螨属包括：美洲尘螨（也称粉尘满）、欧洲尘螨（也称房尘螨或屋尘螨）、粗脚粉螨、腐食酸螨；上皮抗原包括：人上皮、马上皮、猫上皮、犬上皮、绵羊上皮、混合羽毛、鼠上皮、兔上皮、豚鼠上皮、家禽上皮、金丝雀上皮等；树种包括：桦树、柳树、枞树、雪松、槭树、胡桃、榛子、桤木、橡树、山毛榉、榆树、山胡桃、白杨、红雪松、白松、小无花果树、栎树、柏树、橄榄树、接骨木等；草类包括：梯牧草、肯塔基兰草、狗牙根、车前草、小糠草、羊茅草、小麦、大麦、玉米、豕草、菸草、艾蒿、荨麻、刺藜、苍耳、鸭茅等；花粉包括：黄菊、苜蓿、假豕草、蒲公英、向日葵、玫瑰、金盏花、野菊花、雏菊、芥菜、红三叶草等；霉菌类包括：链格孢属、曲霉、芽霉菌、单孢枝霉、毛霉、疱霉、假头孢子、葡萄孢、根霉、长蠕孢菌、根生菌、青霉菌、附球菌、梭霉菌、分枝孢子菌、弯孢霉、红酵母、大麦黑粉菌、燕麦黑粉菌、小麦黑粉菌；其他还包括：烟草、棉花、报纸、木丝绵、蟑螂等。很多厂家在生产抗原时，会将多种同类抗原混合，合并为一种试剂。

抗原的种类繁多，且地理环境和生活方式的不同，不同地区的AD犬的阳性反应抗原差异很大，非常分散，很难制定统一的抗原检测套餐。例如，猫上皮是广泛分布的抗原，AD犬对此抗原的反应率在某地为71%，而另一地为2%。同样世界性分布的曲霉，不同调查的发现从84%到0%。

各地存在的抗原致敏率的差异可能是由于不同的生产厂家、不同的生产批次，以及不同的抗原生物活性导致的，另外，皮内试验操作时的剂量和浓度也不尽统一，抗原制剂的佐剂也可能引发皮肤反应。皮内试验的假阴性或假阳性结果随之出现。

总结皮内试验检测的抗原致敏率，没有发现一种特殊的抗原能够被确定一定致敏，也没有一种抗原能够完全被排除出致敏行列。总的来说，尘螨类和上皮类在欧美的调查中都是致敏率很高的抗原，而花粉和霉菌在美洲重要，在欧洲却相对次要。