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皮内试验概况及操作程序

2020-05-29 17:41:33 浏览次数:

皮内试验是在模拟异位性皮炎——使皮肤接触空气抗原,并观察其反应。试验的特异性为50-90%(排除其他瘙痒症特异性将提高),敏感性为90%。对于季节性发病的动物,试验时间最好选择在症状出现的2-3个月后。

操作程序:

1.将动物镇静并侧卧。赛拉嗪(Xylazine)0.5-0.75mg/kg,或美托咪定(medetomidine)10-20μg/kg,是适合的镇静剂。很多其他的麻醉或镇静剂会降低皮内试验的反应性。

2.将胸廓轻柔剃毛,面积为15×10cm。

3.预先用黑色记号笔标出注射点。

4.将每种抗原以0.05ml的剂量注射入标记点对应的真皮内,同样剂量的组胺(1:100,000)作为阳性对照,生理盐水作为阴性对照。

5.10-20分钟后读取反应结果。皮肤会出现风疹样变化,阳性对照为4分,阴性对照为0分。其他注射部位通过风疹面积、发红程度、隆起高度与阳性和阴性对照相比,人为给予评分。最高分为4分,最低分为0分。

6.少数病例会在24-48小时后出现迟发型变态反应,需要主人在家观察,或住院观察。

7. 最为脱敏治疗的抗原种类不要超过10种,注射剂量从低浓度向高浓度逐渐递增,注射间隔逐渐拉长,从最初的间隔一天,到最后可能保持在10-20天注射一次。通常为终生性治疗。

皮内注射时注射技术问题导致局部刺激,可能引起假阳性反应,例如针头损伤、注入空气和抗原容量大于对照组。假阴性反应可能缘于药物干扰(例如糖皮质激素、抗组胺药,降血压药等)。理论上讲,应激可以导致自体糖皮质激素升高,使皮肤过敏试验无反应。注射技术错误,例如注射于皮下而不是皮内;或是抗原量过低,让皮肤不能形成应有的反应;抗原过期或过度稀释等因素均使结果为假阴性。

皮内试验前要停用所有糖皮质激素和抗组胺药(见表1);试验时需要剃毛,并镇静动物;另外需要购买多种抗原试剂,并合理保存;医生判读结果的能力需要特殊的培训。由于上述原因,在欧美等国家,做皮内试验的病例需要转诊至皮肤病专科医院。

目前世界知名的犬过敏原生产公司有Greer、Heska、Artuvetrin等。国际卫生组织已经建立了人医用抗原标准化,而兽医用抗原则没有标准化。因此无从得知哪家公司的产品(包括人医和兽医)更有优势,。兽医临床常将水性抗原提取物用于皮内试验。抗原的储存基质是甘油。抗原均为浓缩制剂,更适合作为疫苗,用于脱敏治疗,稀释后才能用作皮内试验的试剂。通常稀释后的抗原保存时间变短,即使正确存放,通常必须在8周内用完。

皮肤病医生根据当地的植物群等选择抗原,抗原种类越多越好,当然费用也会随之升高。当地抗原的信息可以到过敏实验室、兽医皮肤病专科医院、人医变态反应科室和气象局等处了解,也可以查阅兽医过敏性皮肤病的文献和教科书。需要注意的是,对人重要的抗原未必对犬也同样重要。即使植物和传粉很确定的区域,植被和气候也存在变数。所以应该每年评估皮内试验用抗原的种类,并且制定新的抗原种类,很少出现阳性反应的抗原应该剔除掉。大量环境抗原涉及于犬AD的发病机制中。

众多专家和学者通过皮内试验总结了AD犬反应阳性的空气抗原种类。常用抗原包括屋尘、表皮螨属、各种皮屑、树种、草和杂草、花粉、霉菌及其他混杂抗原。表皮螨属包括:美洲尘螨(也称粉尘满)、欧洲尘螨(也称房尘螨或屋尘螨)、粗脚粉螨、腐食酸螨;上皮抗原包括:人上皮、马上皮、猫上皮、犬上皮、绵羊上皮、混合羽毛、鼠上皮、兔上皮、豚鼠上皮、家禽上皮、金丝雀上皮等;树种包括:桦树、柳树、枞树、雪松、槭树、胡桃、榛子、桤木、橡树、山毛榉、榆树、山胡桃、白杨、红雪松、白松、小无花果树、栎树、柏树、橄榄树、接骨木等;草类包括:梯牧草、肯塔基兰草、狗牙根、车前草、小糠草、羊茅草、小麦、大麦、玉米、豕草、菸草、艾蒿、荨麻、刺藜、苍耳、鸭茅等;花粉包括:黄菊、苜蓿、假豕草、蒲公英、向日葵、玫瑰、金盏花、野菊花、雏菊、芥菜、红三叶草等;霉菌类包括:链格孢属、曲霉、芽霉菌、单孢枝霉、毛霉、疱霉、假头孢子、葡萄孢、根霉、长蠕孢菌、根生菌、青霉菌、附球菌、梭霉菌、分枝孢子菌、弯孢霉、红酵母、大麦黑粉菌、燕麦黑粉菌、小麦黑粉菌;其他还包括:烟草、棉花、报纸、木丝绵、蟑螂等。很多厂家在生产抗原时,会将多种同类抗原混合,合并为一种试剂。

抗原的种类繁多,且地理环境和生活方式的不同,不同地区的AD犬的阳性反应抗原差异很大,非常分散,很难制定统一的抗原检测套餐。例如,猫上皮是广泛分布的抗原,AD犬对此抗原的反应率在某地为71%,而另一地为2%。同样世界性分布的曲霉,不同调查的发现从84%到0%。

各地存在的抗原致敏率的差异可能是由于不同的生产厂家、不同的生产批次,以及不同的抗原生物活性导致的,另外,皮内试验操作时的剂量和浓度也不尽统一,抗原制剂的佐剂也可能引发皮肤反应。皮内试验的假阴性或假阳性结果随之出现。

总结皮内试验检测的抗原致敏率,没有发现一种特殊的抗原能够被确定一定致敏,也没有一种抗原能够完全被排除出致敏行列。总的来说,尘螨类和上皮类在欧美的调查中都是致敏率很高的抗原,而花粉和霉菌在美洲重要,在欧洲却相对次要。

药物类别

药物名称

停药时间

口服类固醇

地塞米松、泼尼松、泼尼松龙和曲安西龙

4周

注射类固醇

长效地塞米松(Depo-Medrol)

长效醋酸甲强龙 (Depo-Medrol)

曲安西龙 (Vetalog)

14周

10 周

3周

外用类固醇

曲安西龙 (Genesis spray)

地塞米松 (Gentocin spray)

氢化可的松(* Resicort lotion,不会影响皮肤试验效果)

3周

抗组胺药

扑尔敏、苯海拉明、阿米替林等

2周

环孢素

环孢素(Atopica, Gengraf)

不需停药

镇静药

乙酰丙嗪

3天


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